Анализ теломеразной активности методом Telospot. Дешево и сердито.

Теломераза - необычный гибридный фермент, состоящий из белковой части и молекулы РНК. Белковая часть теломеразы представлена обратной транскриптазой, использующей в качестве матрицы теломеразную РНК. Задача теломеразы заключается в синтезе теломерной ДНК, необходимой для стабилизации линейных хромосом эукариот. В соматических клетках человека теломераза не работает, поэтому через определенное количество клеточных циклов хромосомы теряют стабильность, а клетка переходит в состояние сенессенса (старения). Механизм сенессенса является серьезным препятствием на пути развития раковых заболеваний, а реактивация теломеразы - один из необходимых этапов трансформации нормальной клетки в раковую.

Поиск ингибиторов теломеразы - потенциальных антираковых агентов - занятие непростое, учитывая, что отсутствует удобный метод анализа теломеразной активности. Точнее, такой метод отсутствовал до настоящего времени. Решение нашли сотрудники лаборатории швейцарского исследователя Иохима Лингнера. В качестве замены классической TRAP-реакции (telomere repeat amplification protocol) ученые предлагают детектировать продукты теломеразы с помощью... саузерн-блоттинга!

Идея нового метода, получившего название Telospot заключается в следующем: клетки человека трансфецируют плазмидами, кодирующими обе теломеразные субъединицы - обратную транскриптазу и теломеразную РНК. Экстракт из "супертеломеразных" клеток используют для удлинения праймера-затравки Продукты реакции наносят на мембрану и окрашивают радиоактивно меченым зондом, узнающим теломерную ДНК. По интенсивности сигнала судят об активности фермента.

В отличие от классических способов анализа теломеразной активности, Telospot легко поддается автоматизации. Скринировать библиотеки потенциальных ингибиторов теломеразы таким методом - одно удовольствие.

Источник: MolBiol.ru